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高速离心机高速离心技术分析

[导读]分析超速离心技术有两种实验模式,即沉降平衡实验和沉降速度实验。

分析超速离心技术有两种实验模式,即沉降平衡实验和沉降速度实验,基于的原理完全不同。沉降速率实验是基于流体动力学理论,实验中样品被高速旋转,溶质分子向样品池底部移动,通过记录的数据来测定溶质分子运动的速率。运动速率用沉降系数表示,它取决于相对分子质量、分子形状或构象。对于不同组分的样品,根据不同的沉降系数检测每个组分。一个颗粒悬浮于溶剂并在离心场中发生沉降时,粒子在离心力Fc和浮力Fb作用下加速运动,离心力减去浮力为分子颗粒受到的净离心力。摩擦力随粒子运动速度增加而增大,当净离心力与摩擦力大小相等,方向相反,分子颗粒以恒定速度移动。与此相反,沉降平衡是基于热力学理论,实验一般在较低的转速下进行(8000~20000r/min),当沉降作用与扩散作用达到平衡时可以测定分子平衡浓度的分布。在平衡状态下,浓度的分布只决定于质量,而与分子的形状无关。离心开始时,分子颗粒发生沉降,一段时间以后,沉降的结果造成了浓度梯度,因而产生了蛋白质分子反向扩散运动,当反向扩散与离心沉降达到平衡时,浓度分布就固定不变了。

分析超速离心技术可以用来研究溶液状态下蛋白与蛋白、蛋白与小分子以及蛋白与核酸之间的相互作用, 确定相互作用的结合方式,并测定相互作用系统的结合/解离常数。

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